3.5. Высокоэффективная жидкостная хроматография

Базовым методом анализа качества субстанций и готовых лекарственных средств в странах с развитой фармацевтической промышленностью (США, Англия, Япония, страны ЕС) является высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). С одной стороны, данный метод по своим характеристикам соответствует требованиям количественного анализа около 80-90% препаратов. С другой стороны, современные хроматографические ВЭЖХ-системы позволяют контролировать качество сырья и готовых лекарственных препаратов, используются в технологических процессах разделения и очистки многокомпонентных смесей широкого круга лекарственных веществ различного действия. Высокоэффективная жидкостная хроматография может в значительной мере помочь решить проблемы, накопившиеся в фармацевтическом производстве за последние десятилетия, связанные с производством чистых субстанций. Метод ВЭЖХ позволяет доводить до необходимых требований чистоты относительно дешевые, но часто некачественные субстанции, в частности, которые производят в странах Азии. На применении промышленной ВЭЖХ базируются новые технологии получения и выделения лекарственных веществ, в частности синтетических и природных пептидов, генноинженерных продуктов.

Особенности жидкостной хроматографии

 В классическом варианте жидкостной хроматографии (ЖХ) в стеклянную колонку длиной 1-2 м, заполненную сорбентом (размер частиц> 100 мкм), вводят анализируемую пробу и пропускают элюент. Скорость прохождения элюента под действием силы тяжести мала, а продолжительность анализа значительна. Классический вариант все еще применяют в лабораторной практике, поскольку он не требует сложного оборудования. Однако, благодаря использованию сорбентов с размером зерен 10-30 мкм, поверхностно- и объемно-пористых сорбентов с размером частиц 5-10 мкм, нагнетательных насосов, а также чувствительных детекторов произошел переход от классической к высокоэффективной жидкостной хроматографии. Быстрый массоперенос при высокой эффективности разделения позволяет использовать ВЭЖХ для разделения и определения молекул (адсорбционная и распределительная хроматографии), для разделения и определения ионов (ионообменная, ионная, ион-парная хроматографии), для разделения макромолекул (эксклюзионная хроматография). Методами аффинной лигандообменной хроматографии разделяют биологически активные молекулы и оптические изомеры.

Принципиальная схема жидкостного хроматографа представлена ​​на рис. 3.5.1. Прибор работает следующим образом. Насос высокого давления создает регулируемый поток элюента через колонку, помещенную в термостат. Сквозь кран-дозатор с помощью шприца в поток элюента вводится анализируемая проба, которая потоком растворителя переносится в колонку и разделяется на компоненты. Поток после выхода из колонки попадает в детектор, где регистрируется или оптическая плотность, или показатель преломления каждого компонента смеси (или другой показатель). Хроматографические пики записываются с помощью электронного автоматического потенциометра.