Бумажная распределительная хроматография

Берут полосу фильтровальной бумаги длиной 30-50 см и шириной 1,5 см и на один ее край наносят каплю анализируемой смеси, а второй конец полосы опускают в органический растворитель, насыщенный водой. При медленном продвижении растворителя по бумаге происходит непрерывное распределение веществ смеси между двумя жидкими фазами. Продвижение подвижного растворителя по бумаге может быть как нисходящим, так и восходящим. Хроматографическое разделение заканчивают, когда фронт подвижного растворителея достигает 2/3 длины фильтровальной полосы, хроматограмму высушивают и проявляют (обрабатывают) реагентом, который дает цветные реакции с анализируемыми соединениями. Полученная хроматограмма представляет собой совокупность цветных пятен, расположенных в определенном порядке вдоль полосы бумаги.

Простым и убедительным способом анализа является так называемый «способ свидетелей». На одной и той же полосе бумаги разделяют исследуемую смесь веществ, и отдельно набор веществ, присутствие которых в смеси предполагается. Растворы наносят на бумагу в один ряд. После проявления зон визуально сопоставляют положения пятен для известных и неизвестных веществ.

Вещества на проявленной хроматограмме устанавливают не только по окраске пятен, которые видны при дневном освещении, но и по люминесценции в ультрафиолетовом свете. Возможности метода расширяются применением радиоактивных изотопов.

Методы количественного хроматографического анализа на бумаге могут быть разделены на две группы: методы, не требующие удаления определяемого вещества с бумаги, и методы, основанные на вымывании разделенных веществ. В первом случае используют зависимость интенсивности окраски и величины площади пятна от количества вещества. Строят градуировочные графики по серии стандартных растворов с различным содержанием определяемого вещества. Однако площадь и интенсивность пятна может зависеть не только от концентрации пятна, но и от размера капли, сорта бумаги, качества растворителя, температуры и других условий. Поэтому только при строгом соблюдении одинаковых условий разделения при градуировке и анализе можно получить правильные результаты. Более точные результаты получают при измерении интенсивности окраски пятна визуально или с помощью специально приспособленных к измерению плотности окраски денситометра, который работает по принципу фотометрирования проходящего через хроматограмму светового потока.

В методе вымывания полученную на бумаге хроматограмму разрезают так, чтобы в каждой части находилось только одно пятно. Для увеличения количества определяемого вещества многократно хроматографируют одну и ту же смесь, вырезают соответствующие пятна и подвергают их экстракции. Таким путем удается собрать количество вещества, необходимое для его изучения. Метод трудоемкий, но достаточно точный.

Выпускаются различные сорта хроматографической бумаги, например № 1, 2, 3, 4. Они отличаются по плотности, а следовательно, и по скорости движения растворителя. Бумага № 1 и № 2 - менее плотная - называется «быстрой». Бумага №3 и №4 - более плотная - называется «медленной». Существенное значение имеет структура и ориентация волокон бумаги. Для четкого разделения необходимо учитывать направление волокон бумаги. Причем оно должно совпадать с направлением движения растворителя.