68.2. Производные фолиевой кислоты

Структурным аналогом и антагонистом кислоты фолиевой является метотрексат (табл. 68.2). При создании метотрексата был использован принцип подражания естественным метаболитам для поиска противоопухолевых средств. Метотрексат представляет собой смесь 4-дезокси-4-амино-N-10-метилфолиевой кислоты и других птериновых соединений. Синтез основного компонента метотрексата практически идентичен получению кислоты фолиевой (см). Отличие состоит в использовании для трехкомпонентной конденсации тетрааминопиримидина, трихлорацетона и N-[4-(N-метиламинобензоил)] глутамата бария:

68.2. Свойства метотрексата

Лекарственное вещество	Описание
Methotrexate — метотрексат	Желтый или оранжево-желтый мелкокристаллический порошок. Удельное вращение от +19 до +24 (1%-ный раствор в растворе карбоната натрия)

Подобно кислоте фолиевой метотрексат практически нерастворим в воде, этаноле, дихлорэтане, эфире, но легко растворим в разведенных растворах щелочей и карбонатов.

Подлинность метотрексата устанавливают по ИК- и УФ-спектрам поглощения. ИК-спектр должен соответствовать спектру сравнения, а УФ-спектр 0,001%-ного раствора в 0,1 М растворе гидроксида натрия в области 240-400 нм должен иметь три максимума поглощения при 258, 303 и 370 нм. Отношение оптических плотностей при 303 и 370 нм должно составлять 2,8–3,3. Метотрексат подобно кислоте фолиевой окисляется перманганатом калия, образуя голубую флуоресценцию в УФ-свете. В качестве окислителя используют также калия хлорат.

Для установления подлинности используют бумажную хроматографию (хроматографическая бумага — Ленинградская «С» 6x30). Наносят на линию старта раствор метотрексата и кислоты фолиевой, хроматографируют в защищенной от света камере с фосфатным буфером (рH 5,75–5,85). Затем сушат и просматривают в УФ-свете при 254 нм. По отношению к пятну кислоты фолиевой обнаруживают и устанавливают величину R_s метотрексата и наличие не более трех флуоресцирующих пятен других птериновых соединений.

Аналогично, но с точной навеской метотрексата выполняют количественное определение, сочетая бумажную хроматографию с УФ-спектрофотометрией (хроматоспектрофотометрия). После хроматографирования испытуемого вещества и ГСО кислоты фолиевой вырезают зоны с пятнами метотрексата, кислоты фолиевой и из полоски бумаги (для контрольного опыта). Бумагу с зонами измельчают, элюируют 0,1 М раствором гидроксида натрия по 3 раза каждую пробу. Элюаты сливают в мерные колбы, доводят до метки и спектрофотометрируют относительно контрольного раствора (элюат из чистой полосы хроматографической бумаги) элюат метотрексата при 258 нм, а кислоты фолиевой — при 256 нм. Расчет содержания метотрексата (не менее 90%) выполняют по формуле с помощью величин оптических плотностей и коэффициента пересчета.

Количественное определение можно выполнить (МФ) методом ВЭЖХ, используя колонку высотой 10 см, внутренним диаметром 6 мм, заполненную силикагелем с октадецилсилильным покрытием. В качестве подвижной фазы берут смесь ацетонитрила и фосфатно-цитратного буфера (8:92). Детектором служит УФ-спектрофотометр (при длине волны 303 нм). Расчет содержания выполняют по площадям пиков испытуемого и стандартного образцов.

Хранят метотрексат по списку Б, в плотно укупоренной таре, предохраняющей от действия света, в сухом месте при температуре от +5 до +10C. Необходимо осторожно обращаться с метотрексатом, избегая попадания его на кожу и слизистые. Метотрексат — цитостатическое (противоопухолевое) средство. Применяют его для лечения острых лейкозов, при злокачественных заболеваниях матки, молочной железы, раке легкого и др. Назначают внутрь в таблетках по 0,0025 г, а также внутримышечно и внутривенно.