Очистка и приготовление образцов

Согласно установленным правилам, для анализа на запрещенные субстанции при допинг-контроле спортсмены сдают главным образом мочу. Кроме того, в определенных случаях для идентификации конкретных препаратов могут быть получены образцы крови, плазмы/сыворотки и волос. Приготовление образцов является чрезвычайно важным элементом допинг-контроля, поскольку в значительной мере обеспечивает достижение максимально возможной определенности результатов и необходимой чувствительности при проведении анализов. К настоящему времени разработаны разнообразные приемы очистки образцов от солей и других примесей, в частности выделения целевого анализируемого вещества.

Жидкостная экстракция

Чаще всего и, вероятно, дольше всего используется метод приготовления образцов жидкостной экстракции. В одной из первых работ, посвященных идентификации бензедрина (рацемическая смесь амфетаминсульфата) и его метаболитов в моче человека, жидкостная экстракция применялась для определения скорости экскреции (Richter, 1938). В частности, пробы мочи подвергали гидролизу 2 н. гидроксидом натрия и экстрагировали петролейиым эфиром. В последующие десятилетия были описаны многочисленные методики очистки веществ, содержащихся в биологических жидкостях, с применением жидкостной экстракции. В основу всех этих методик был положен один и тот же принцип: изменение pH до необходимого значения и экстракция кислых, нейтральных или щелочных компонентов (Keller, Ellenbogen, 1952; Axelrod, 1954; Beckett, Rowland; 1965; Beckett, Wilkinson, 1965; Kolb, Patt, 1965; Cartoni, Cavalli, 1968). Знание величины pi анализируемых веществ предоставляет возможность многократной экстракции проб и/или повторной экстракции их компонентов при различных pH различными растворителями. Стремление к созданию более детальных, специфических и чувствительных методов анализа сопровождалось совершенствованием и развитием процедур жидкостной экстракции, направленным на снижение количества коэкстрагируемых примесей, создающих помехи при анализе. Разработанные принципы и сегодня используются в методах скрининга и подтверждения при проведении анализов с целью допинг-контроля (Donike et al., 1970; Spyrdaki et al., 2001; Van Eenoo et al., 2001; Thevis et al., 2003b), например, стимуляторы, такие, как амфетамины, эфедрины и их производные, обычно экстрагируют из проб мочи эфирами в щелочных условиях, вещества, экстрагированные органической фазой, концентрируются и подвергаются дальнейшему анализу ГХ-МС и/или ГХ-АФД. Помимо того, жидкостная экстракция применяется для анализа кортикостероидов (Fluri et al., 2001), диуретиков, веществ, блокирующих активность р-рецепторов и анаболических стероидов при различных условиях (т. е. в присутствии минеральных солей, органических растворителей и при разных значениях pH) (Geyer et al., 1997; Thevis et al., 2001; Deventer et al., 2002).

Очень мощным средством оказалась так называемая рсэкстракция или повторная экстракция, которая применялась уже в 1952 г. (Keller, Ellenbogen, 1952). Этот метод применяется для повышения чистоты образцов, которые предстоит подвергнуть анализу. В частности, экстракция анализируемых веществ в щелочных условиях в органический растворитель с последующим перемещением интересующих исследователя веществ из органической в закисленную водную фазу (0,06 н., НС1) доказала свою пригодность для подтверждающих тестов, например для Р2-агониста кленбутерола, благодаря крайне эффективному снижению количества разнообразных биологических примесей (Sigmund et al., 1998).