Методы определения стг-связывающих белков

Классические методы определения высокоаффинных и низкоаффинных СТГ-связывающих белков основаны на оценке их функциональной способности связываться с мечеными и радиоактивными изотопами СТГ с последующим разделением свободного СТГ и комплексов с GHBP методом эксклюзионной хроматографии (Baumann et al., 1986; Herington et al., 1986b). В большинстве случаев этот метод позволяет получить количественную оценку, поскольку в физиологических условиях GHBP находятся в сыворотке преимущественно в несвязанном состоянии. Поправку на связывание высокоаффинного GHBP с эндогенным СТГ следует вносить при концентрациях гормона, превышающих 10 нг-мл-1 (Baumann et al., 1989а). Варианты этого базового метода определения GHBP связыванием с СТГ используют другие методы разделения свободного и связанного СТГ, например сорбцией активированным углем или иммунопреципитацией с антителами к рецептору СТГ (Barnard et al., 1989; Amit et al., 1990; Ho et al., 1993). Для грызунов были разработаны специфические методы анализа, позволяющие различить СТГ-связывающие белки и рецептор СТГ с использованием антител против уникального гидрофильного “хвоста” молекулы GHBP фызунов (Barnard et al., 1994). Однако этот подход нельзя использовать для тех видов, где образование GHBP происходит путем протеолиза рецептора СТГ (т. е. человека, кролика и др.). Для детекции высокоаффинного СТГ-связывающего белка человека был разработан двухсайтный сэндвич-анализ, использующий некоторые принципы твердофазного иммуноанализа ELISA, — гормон-опосредованный иммунно-функциональный анализ (ligand-mediated immuno-functional assay, LIFA) (Carlsson et al., 1991). Результаты, полученные с помощью этого анализа, хорошо согласуются с оценками стандартных методик, основанными на образовании комплекса GHBP—СТГ, однако по неизвестным причинам он дает абсолютные количественные оценки GHBP ниже по сравнению с другими методами (Mercado et al., 1993). Существует одно сообщение о разработке метода определения GHBP человека, основанного на применении принципов классического радиоиммуниого анализа (меченый радиоактивными изотопами GHBP и антитела против GHBP) (Kratzsch et al., 1995а). Этот метод анализа не зависит от способности GHBP связываться с СТГ и поэтому может быть использован для количественной оценки мутантных форм СТГ-связывающего белка, неспособных образовывать комплексы с гормоном роста (как в случае некоторых вариантов синдрома Ларона). Кроме того, был разработан специфический метод радиоиммунологического анализа для GHBP человека, содержащего экзон 3 (Kratzsch et al., 1997b). Существуют также сообщения о применении других вариантов методов оценки GHBP различных видов животных, включая человека, крысу и мышь, которые основаны на тех же принципах и подходах. К сожалению, о корреляции результатов всех этих методов анализа информации практически нет. В продаже имеются коммерческие наборы для анализа СТГ-связывающих белков, однако и для них сведения о согласованности с уже существующими методами оценки, как правило, отсутствуют. Определение СТГ-связывающих белков все еще остается преимущественно исследовательской задачей, основное практическое применение этих методов в практической медицине ограничивается диагностикой нечувствительности к СТГ при синдроме Ларона.

Для анализа низкоаффинного GHBP стандартизованных методов не существует. Количественную оценку этого компонента плазмы проводили методом образования комплексов с СТГ и последующим разделением эксклюзионной хроматографией (Baumann et al., 1989а; Tar et al., 1990) либо иммунопреципитацией с антителами против альфа2-макроглобулина (Kratzsch et al., 1995b).